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                網站首頁技術中心 > 人褪黑素(MT)ELISA檢測試劑盒使用說明書
                產品目錄
                人褪黑素(MT)ELISA檢測試劑盒使用說明書
                更新時間:2023-11-14 點擊量:190

                Human褪黑素(MT)ELISA檢測試劑盒

                使用說明書

                檢測原理

                試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被褪黑素(MT)抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的褪黑素(MT)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

                樣品收集、處理及保存方法

                1.  血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

                2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

                3.  細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

                4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

                5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

                自備物品

                1. 酶標儀(450nm)

                2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

                3. 37℃恒溫箱

                操作注意事項

                1.  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正?,F象,水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。

                2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

                3.  濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍,最終結果乘以5才是樣本實際濃度。

                4.  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

                5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

                試劑盒組成

                名稱

                96孔配置

                48孔配置

                備注

                微孔酶標板

                12孔×8條

                12孔×4條

                標準品

                0.3mL*6管

                0.3mL*6管

                樣本稀釋液

                6mL

                3mL

                檢測抗體-HRP

                10mL

                5mL

                20×洗滌緩沖液

                25mL

                15mL

                按說明書進行稀釋

                底物A

                6mL

                3mL

                底物B

                6mL

                3mL

                終止液

                6mL

                3mL

                封板膜

                2張

                2張

                說明書

                1份

                1份

                自封袋

                1個

                1個

                注:標準品(S0-S5)濃度依次為:0、5、10、20、40、80 pg/mL

                試劑的準備

                 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

                洗板方法

                1.  手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

                2.  自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

                操作步驟

                1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

                2.  設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

                3.  樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。

                4.  除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

                5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

                6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

                7.  每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

                結果判斷

                 繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。

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                試劑盒性能

                1.  準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值,大于等于0.9900。

                2.  靈敏度:最DI檢測濃度小于1.0 pg/mL。

                3.  檢測范圍:1 - 80 pg/mL。

                4.  特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

                5.  重復性:板內、板間變異系數均小于15%。

                6.  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

                7.  有效期:6個月

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